La mezcla maestra de clonación sin fisuras es una mezcla de reacción lista para usar para reacciones de clonación sin fisuras. Permite el ensamblaje exitoso de múltiples fragmentos de ADN, independientemente de la longitud del fragmento o la compatibilidad final. Ha sido adoptado rápidamente por la comunidad de biología sintética debido a su facilidad de uso, flexibilidad e idoneidad para grandes construcciones de ADN. Seamless Cloning Master Mix une de manera eficiente múltiples fragmentos de ADN superpuestos en una reacción isotérmica de un solo tubo.
El sistema permite la clonación de los fragmentos de ADN en prácticamente cualquier Escherichia linealizada. coli, no requiere sitios de recombinación preexistentes ni secuencias de ADN adicionales, y elimina la necesidad de tratamientos enzimáticos extensivos del ADN, como la restricción y la ligadura. La mezcla de enzimas proporcionada con Seamless Cloning Master Mix reconoce y ensambla con precisión los fragmentos de ADN que comparten una homología final de 15-20 pares de bases (bp) que puede crearse mediante amplificación por PCR. El resultado final es una molécula de ADN completamente sellada de doble hebra que puede servir como molde para PCR, RCA o una variedad de otras aplicaciones de biología molecular, incluida la transformación directa.
Con este kit, puede clonar múltiples fragmentos de ADN en un solo vector sin subclonar, crear vectores de expresión modulares con partes intercambiables, construir proteínas de fusión integradas, eliminar y reemplazar segmentos de ADN, hacer fusiones de proteínas internas, intercambiar etiquetas en un gen, agregue UTR a un ADNc, inserte sitios de restricción y más.
